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                          Western Blotting 问题解答
                          1、胶片上存在反转印象(如:亮的条带、黑的背景)?

                          原因:HRP的浓度过高;

                          解决:稀释HRP至少10倍。

                          2、膜上有黄色或棕色的沉积?

                          原因:HRP的浓度过高;

                          解决:稀释HRP至少10倍。

                          3、在暗室中条带过于明亮?

                          原因:HRP的浓度过高;

                          解决:稀释HRP至少10倍。

                          4、条带的发光时间持续了至少8小时?

                          原因:HRP的浓度过高;

                          解决:稀释HRP至少10倍。

                          5、信号太弱或没有?

                          原因:

                          1.太多的HRP积聚导致信号快速的消退;

                          2.抗原或抗体的浓度不够;

                          3.转印不成功;

                          4.HRP或其他底物的效价降低。

                          解决:

                          1.稀释HRP至少10倍;

                          2.增加其浓度;

                          3.寻找合适的转移方法和条件;

                          4.选择其他的合适底物。

                          6、背景高?

                          原因:

                          1.HRP浓度过高;

                          2.封闭无效;

                          3.不适合的封闭试剂;

                          4.洗涤不充分和洗涤液的量;

                          5.胶片曝光过度;

                          6.抗原或抗体的浓度太高。

                          解决:

                          1.稀释HRP至少10倍;

                          2.寻找合适的封闭方法;

                          3.选用其他的封闭试剂;

                          4.增加洗涤的时间,次数;

                          5.减少曝光时间;

                          6.稀释抗原或抗体。

                          7、蛋白质条带上有空泡影像?

                          原因:

                          1.蛋白质没有被充分转印;

                          2.膜没有预先浸湿;

                          3.在胶片和膜之间有气泡。

                          解决:

                          1.寻找合适的转移方法和条件;

                          2.在转印前充分浸湿;

                          3.在暴光之前赶走气泡。

                          8、胶片上背景弥散?

                          原因:HRP标记的抗体出现了积聚;

                          解决:稀释HRP至少10倍。

                          9、无特异性条带?

                          原因:

                          1.HRP浓度过高;

                          2.SDS促使非特异蛋白质条带黏附在目的蛋白质条带上。

                          解决:

                          1.稀释HRP至少10倍;

                          2.在操作过程中不要加SDS。

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