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                          免疫組化問題解答
                          1、染色過強?
                          • 原 因
                          • 解決方法
                          • 抗體濃度過高或孵育時間過長
                          • 降低抗體滴度、抗體孵育時間:室溫1小時或4度過夜
                          • 孵育溫度過高超過37度
                          • 一般在室溫20-28度
                          • DAB顯色時間過長或濃度過高
                          • 顯色時間不超過5-12分鐘,以顯微鏡下觀察為準
                          2、非特異性背景染色?
                          • 原 因
                          • 解決方法
                          • 操作過程中沖洗不充分
                          • 每步沖洗3次每次5分鐘
                          • 組織中含過氧化物酶未阻斷
                          • 可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長
                          • 組織中含內原性生物素
                          • 正常非免疫動物血清再封閉
                          • 血清蛋白封閉不充分
                          • 血清蛋白封閉不充分
                          3、染色弱?
                          • 原 因
                          • 解決方法
                          • 抗體濃度過低、孵育時間過短
                          • 提高抗體濃度、孵育時間不能少于60分鐘
                          • 試劑超過有效使用時間
                          • 應更換試劑
                          • 操作中添加試劑時緩沖液未瀝干
                          • 每步滴加試劑前瀝干切片中多余的緩沖液
                            使試劑稀釋 (應防止切片干燥)
                          • 室溫太低,低于15度
                          • 要改放在37度孵育箱孵育30-60分鐘或4度冰箱過夜
                          • 蛋白封閉過度
                          • 封閉不要超過12分鐘
                          4、染色陰性?
                          • 原 因
                          • 解決方法
                          • 操作步驟錯誤
                          • 應重試,設陽性對照
                          • 組織中無抗原
                          • 設陽性對照以驗證試驗結果
                          • 一抗與二抗種屬連接錯誤
                          • 仔細確定一抗二抗種屬無誤
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